蕭美琴1971年出生於日本神戶,父親蕭清芬是臺南人,曾任台南神學院院長,母親邱碧玉是美國人,也是音樂老師。融合臺灣本土,以及美、日多元的成長背景,讓她成為家族的溝通橋梁,也為她日後在國際、外交領域堅韌、靈活、專業的「戰貓精神」奠定根基。
蕭美琴畢業於臺南師範專科學校附屬小學、台南市後甲國民中學。國中畢業後隨家庭移居美國。高中畢業後就讀歐柏林學院,於1993年取得東亞研究學士學位,之後並取得哥倫比亞大學政治學碩士學位,專長為國際關係。
碩士畢業後,先後於1995年擔任民主進步黨駐美代表處活動執行長,1996年擔任國際事務部副主任,1997年升任主任至2006年,並於2000年進入總統府擔任顧問、總統英文秘書及翻譯。
2001年開始,代表民主進步黨參選中央民意代表,並曾擔任第5、6、8、9共四屆立法委員,任內推動花蓮交通建設與農業、性別平權,亦關注外交與人權議題,在外交領域的耕耘及專業,也深獲國內機構與國際組織信任;先後擔任過臺灣民主基金會董事(2003-2020)、亞洲自由民主聯盟(CALD)秘書長(2004-2005)、主席(2018-2020)、以及國際自由聯盟(LI)副主席(2005-2012)等職。
2020年擔任國家安全會議諮詢委員,並於同年7月赴美就任中華民國駐美代表,在全球疫情影響下,仍締造亮眼外交成績,國際媒體評為「華府最有影響力大使之一」;至2023年返臺參與第16任總統、副總統選舉,並當選為中華民國第16任副總統。